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本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及靶向敲除ATG5基因的gRNA引物、表達(dá)系統(tǒng)、細(xì)胞株。本發(fā)明確定靶向ATG5基因的gRNA引物，第一靶點(diǎn)序列T1序列為AGTGGATAATCTTTATGGCATGG；第二靶點(diǎn)序列T2序列為T(mén)CATGACAACATGCTGACAGTGG。本發(fā)明構(gòu)建的ATG5基因敲除的人血管內(nèi)皮細(xì)胞株的總蛋白，檢測(cè)自噬效應(yīng)蛋白LC3?Ⅰ/LC3?Ⅱ、p62和Beclin?1，結(jié)果顯示自噬效應(yīng)蛋白的表達(dá)增強(qiáng)，表明本發(fā)明構(gòu)建的細(xì)胞株成功敲除ATG5基因，沉默ATG5基因的表達(dá)，能夠應(yīng)用于ATG5基因在引起內(nèi)皮細(xì)胞向間充質(zhì)的轉(zhuǎn)化和凋亡的作用機(jī)制。

1、選定專(zhuān)利：顧問(wèn)一對(duì)一服務(wù)，幫助買(mǎi)家選中所需專(zhuān)利，并確認(rèn)賣(mài)家專(zhuān)利可交易；

2、簽訂合同：買(mǎi)賣(mài)雙方與顧問(wèn)協(xié)商交易細(xì)節(jié)，簽訂合同；

3、支付款項(xiàng)：買(mǎi)家依合同約定支付交易款項(xiàng)到運(yùn)營(yíng)平臺(tái)；

4、提供材料：買(mǎi)賣(mài)雙方需要提供《專(zhuān)利代理委托書(shū)》、《轉(zhuǎn)讓協(xié)議》、《解聘書(shū)》等材料給辦理轉(zhuǎn)讓手續(xù)方；

5、辦理手續(xù)：辦理轉(zhuǎn)讓手續(xù)方提交材料至國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局辦理轉(zhuǎn)讓手續(xù)，國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局最快半個(gè)月左右下發(fā)專(zhuān)利轉(zhuǎn)讓《手續(xù)合格通知書(shū)》；

6、證書(shū)交接：買(mǎi)家確認(rèn)收到《專(zhuān)利證書(shū)》、專(zhuān)利轉(zhuǎn)讓《手續(xù)合格通知書(shū)》原件，確認(rèn)無(wú)誤。

7、交易完成：平臺(tái)把交易款項(xiàng)支付給賣(mài)家，至此專(zhuān)利轉(zhuǎn)讓業(yè)務(wù)完成。

保障一：對(duì)于在本平臺(tái)交易的交易品，均由我平臺(tái)驗(yàn)證交易品的有效性；

保障二：客戶通過(guò)本平臺(tái)交易，由我平臺(tái)核實(shí)并確保買(mǎi)賣(mài)雙方身份信息真實(shí)有效；

保障三：通過(guò)本平臺(tái)交易，買(mǎi)家支付交易款項(xiàng)給本平臺(tái)，由本平臺(tái)監(jiān)控交易流程，待確認(rèn)交易完成后支付交易款項(xiàng)給賣(mài)家，全程資金代管，保障買(mǎi)賣(mài)雙方資金安全；

保障四：通過(guò)本平臺(tái)交易，由我平臺(tái)代辦國(guó)家手續(xù)，辦理過(guò)程公開(kāi)透明，進(jìn)度隨時(shí)查詢，確保交易真實(shí)可靠。