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本發明涉及一種通過CRISPR/Cas9系統快速獲得大片段缺失的細胞系基因敲除方法，屬于基因工程和遺傳修飾領域。本發明改造pX458載體，使其帶有DsRed2和ECFP，然后針對目標基因設計多個特異性的sgRNA位點，將其連接至改造載體中，轉染細胞系后利用流式細胞儀對細胞群進行分選，可以非?？焖佾@得基因組被編輯的單細胞，然后用PCR擴增單細胞DNA序列，通過凝膠電泳即可以從中挑選出具有大片段缺失的單細胞。本發明通過將CRISPR/Cas9系統、流式細胞儀單細胞分選和表達載體上的熒光蛋白篩選三者結合起來，可以在短時間內獲得具有大片段缺失的陽性單克隆，極大地提高細胞系基因敲除工作效率。

1、選定專利：顧問一對一服務，幫助買家選中所需專利，并確認賣家專利可交易；

2、簽訂合同：買賣雙方與顧問協商交易細節，簽訂合同；

3、支付款項：買家依合同約定支付交易款項到運營平臺；

4、提供材料：買賣雙方需要提供《專利代理委托書》、《轉讓協議》、《解聘書》等材料給辦理轉讓手續方；

5、辦理手續：辦理轉讓手續方提交材料至國家知識產權局辦理轉讓手續，國家知識產權局最快半個月左右下發專利轉讓《手續合格通知書》；

6、證書交接：買家確認收到《專利證書》、專利轉讓《手續合格通知書》原件，確認無誤。

7、交易完成：平臺把交易款項支付給賣家，至此專利轉讓業務完成。

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