本發明公開了一種用于檢測與結直腸癌長春新堿耐藥相關的miRNA表達的引物、試劑盒、方法及應用,屬于腫瘤生物治療技術領域。本發明首次通過試驗證實SEQ ID NO:1所示miRNA序列與長春新堿的耐藥性相關,miRNA在長春新堿耐藥細胞中高表達、敏感細胞中低表達,因此可以作為腫瘤細胞長春新堿耐藥的標志物。根據該標志物設計的引物、試劑盒及檢測方法可用于臨床判斷腫瘤細胞對長春新堿的耐藥性,進一步指導臨床用藥并實現精準治療,提高療效,降低副作用。本發明為設計腫瘤細胞長春新堿耐藥藥物提供了新的靶點,可用于直接開發拮抗腫瘤細胞長春新堿耐藥性的藥物。