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本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種重組EBV gHgL免疫原的制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)，獲得gH和gL的基因片段，將這兩個(gè)目的片段分別克隆入昆蟲(chóng)表達(dá)載體pMT，經(jīng)質(zhì)粒大提去除內(nèi)毒素后，與抗性篩選質(zhì)粒pCoBlast一起共轉(zhuǎn)染黑腹果蠅Schneider2細(xì)胞，用殺稻瘟菌素進(jìn)行陽(yáng)性克隆篩選，篩選出高效分泌表達(dá)gHgL的S2穩(wěn)定細(xì)胞系。擴(kuò)大培養(yǎng)后，經(jīng)鎳柱親和層析和凝膠過(guò)濾層析兩步純化，即可獲得高均一、高產(chǎn)量、高天然保真性的gHgL。通過(guò)微量熱涌動(dòng)技術(shù)驗(yàn)證了gHgL與受體EphA2的相互作用，適合作為免疫原用于EBV亞單位疫苗以及與gB和gp350聯(lián)合疫苗的研發(fā)。

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